• 021-20985259

噬菌体展示文库构建及筛选技术



1543913472547381.png

A. 免疫文库(Immune library)

通过对骆驼免疫抗原,扩增骆驼重链抗体VHH基因,建立噬菌体展示的纳米抗体文库,再利用噬菌体展示技术从文库中筛选获得抗原特异性的纳米抗体(图1)。迄今为止,已经构建了四十多个噬菌体展示纳米抗体免疫文库,库容大小均在108-109 CFU。筛选获得的纳米抗体耐热性能优良,特异性强,亲和力高,平衡解离常数KD值一般在nM水平。获得的纳米抗体成为下一步治疗性纳米抗体应用的宝贵资源。

1543913500227206.png 

图1  从免疫文库中筛选纳米抗体的流程

Min Zhu, et al, Yakun Wan. J Transl Med. 2014; 12: 352.

Min Zhu, et al, Yakun Wan. Toxins. 2014; 6(12): 3208.

Min Zhu, et al, Yakun Wan. Nanoscale Res Lett. 2014; 9(1): 528.

 

B. 非免疫文库 (Naive library)

天然非免疫噬菌体展示文库是免疫文库的有力支持。当抗原毒性高,致病性强,致死性大或免疫原性低等原因造成无法进行骆驼免疫从而不能构建免疫文库以筛选相应纳米抗体时,天然的非免疫文库作为一种纳米抗体获得的选择起着重要的作用。通过采取24只未经人工免疫任何抗原的血样和一个取自另一只未经免疫的骆驼脾脏,申请人负责构建一个库容超级大,多样性丰富的天然非免疫噬菌体展示文库(图2)。库容为6.86×1011 CFU,是目前已知的最大的天然噬菌体展示纳米抗体文库。课题组的研究人员利用降钙素原PCT和人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白NGAL为靶点蛋白从该文库中成功筛选获得几株相应的纳米抗体,抗体的耐热性能和亲和力均呈现出与免疫文库来源的纳米抗体堪比的水平。以上工作发表在Journal of Nanobiotechnology期刊上,申请了国家发明专利(专利号201410762748.5)。

1543913533810979.png

图2  非免疫文库构建流程

Junrong Yan,Min Zhu et al, Yakun Wan, Journal of Nanobiotechnology. 2015; 13: 33

 

C. 合成文库(Synthetic library)

合成或半合成噬菌体展示纳米抗体文库也是免疫文库的有力支持。以纳米抗体保守框架 cAbBCII10为VHH骨架结构,通过巢式PCR组装,我们成功地合成了一种CDR3区氨 基酸序列随机组合排布同时不含半胱氨酸及终止密码子的噬菌体展示文库(图3)。该文库库容为 1.65×109 CFU,文库多样性丰富。利用人前白蛋白PA和人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白NGAL 为靶标蛋白,成功筛选得到相应的纳米抗体。抗体亲和力高,特异性强,耐热性能良好。以上工作发表在Journal of Translational Medicine 期刊上,申请了国家发明专利(专利号2014104769431)。

1543913683728747.png


1543913741196551.png

 

图 3:噬菌体展示纳米抗体合成文库的构建及靶点特异性纳米抗体的筛选

Junrong Yan, et al, Yakun Wan. Journal of Translational Medicine. 2014;12:343.


上海洛启生物医药技术有限公司版权所有Shanghai Novamab Biopharmaceuticals Co., Ltd 技术支持:朗企科技